漩渦混勻器在生物學(xué)上的應(yīng)用
在分子生物學(xué)中,我們經(jīng)常要做細(xì)胞質(zhì)粒DNA的提取和檢測的試驗,以便可以獲得DNA樣本,或者用于電泳檢測分析,了解樣品中是否含有質(zhì)粒DNA,并判斷分子量的大小等等,因此,質(zhì)粒DNA的提取是基因工程實驗中zui常用的手段之一。
下面小編先為大家什么是質(zhì)粒,質(zhì)粒是一種染色體外的穩(wěn)定遺傳銀子,大小從1kb到200kb不等,大多數(shù)來自細(xì)菌的質(zhì)粒是雙鏈、共價閉合環(huán)狀的分子,并以超螺旋形式存在于宿主的細(xì)胞質(zhì)中。它是細(xì)菌內(nèi)的共生型遺傳因子,主要發(fā)現(xiàn)于細(xì)菌、放線菌和真菌細(xì)胞中,質(zhì)粒具有自主復(fù)制和轉(zhuǎn)錄能力,能在子代細(xì)胞中保持恒定的拷貝數(shù),并表達所攜帶的遺傳信息。
質(zhì)粒的分離是利用質(zhì)粒DNA和染色體DNA在變性與復(fù)性中的差異來達到的目的。當(dāng)菌體在NaOH和SDS溶液中裂解時,蛋白質(zhì)與DNA發(fā)生變性,由于染色體DNA與質(zhì)粒DNA拓?fù)錁?gòu)型不同,染色體DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)解開,而共價閉合質(zhì)粒DNA的氫鍵雖被斷裂,但兩條互補鏈彼此相互盤繞仍會緊密地結(jié)合在儀器。當(dāng)加入中和液后,溶液pH恢復(fù)至中性,在高鹽濃度的情況下,染色體DNA之間交聯(lián)形成不溶性網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)并與蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物等形成沉淀;不同的是質(zhì)粒DNA復(fù)性迅速而準(zhǔn)確,保持可溶狀態(tài)而留在上清中。這樣,通過離心可沉淀大部分細(xì)胞碎片、染色體DNA、RNA及蛋白質(zhì)。除去沉淀后上清中的質(zhì)??捎梅勇确鲁樘徇M一步純化質(zhì)粒DNA。
提取質(zhì)粒DNAzui常見的方法是堿裂解法,具體步驟如下:首先講含有質(zhì)粒的細(xì)菌接種到培養(yǎng)基,經(jīng)過大約12小時的恒溫?fù)u陪后棄去上清液,加入中和液后用漩渦混勻器將溶液充分混勻,然后加入堿液進行沉淀,這就是變性與復(fù)性,zui后的操作就是實驗室常用的沉淀的分離、純化。分離、純化DNA首先取上清液,加入分離液后采用漩渦混勻器混勻溶液,離心取上清液,加入無水乙醇后混勻,離心后棄上清液,干燥DNA即可。
在這個實驗中,我們需要用到漩渦混勻器進行溶液混勻,本公司生產(chǎn)的漩渦混勻器可滿足每一個實驗室的需要和安全標(biāo)準(zhǔn),該漩渦混勻器一旦檢測到試管即自動開始震動混勻,不需要施加任何外力,震動速度可調(diào),時間可設(shè),漩渦混勻器穩(wěn)定性高,非常適合細(xì)胞質(zhì)粒提取實驗。