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自新型冠狀病毒發(fā)現(xiàn)以來(lái),特別是PCR實(shí)驗(yàn)室新型冠狀病毒核酸檢測(cè)工作任務(wù)艱巨。先介紹一下PCR檢測(cè)的流程:
1試劑制備區(qū)
功能:主要是作為貯存試劑的制備、試劑的分裝和主反應(yīng)混合液的制備,試劑和用于標(biāo)本制作的材料應(yīng)直接運(yùn)送至該區(qū),不得經(jīng)過(guò)其它區(qū)域。試劑原材料需貯存在本區(qū)內(nèi),并在本區(qū)內(nèi)制備成所需的貯存試劑。所需要的儀器設(shè)備:
天平(用于精確稱量各類試劑)→超凈工作臺(tái)(涉及對(duì)細(xì)菌的操作均需在超凈工作臺(tái)下完成)→移液器(準(zhǔn)確量取特定體積溶液20-100ul)→純水(超純水18.2ΩM.CM)→藥品冷藏箱(短期保存 )→試劑低溫冰箱(可選2-8°、-20℃)→混勻儀(移取樣本前需要混勻)(推薦艾本森品牌:MixMax漩渦混勻儀)→消毒車(空間環(huán)境消毒)→滅菌鍋(實(shí)驗(yàn)室物品、試劑、培養(yǎng)基消毒滅菌)→PH計(jì)(配置試劑是精確測(cè)量PH值)
2 樣本制備區(qū)
功能:臨床標(biāo)本的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴(kuò)增反應(yīng)管和測(cè)定RNA時(shí)DNA的合成。所需要的儀器設(shè)備
生物安全柜(為了防止有害懸浮微粒、氣溶膠的擴(kuò)散)→樣本低溫冰箱(-20℃,-80℃保存樣本及DNA)→高速臺(tái)式冷凍離心機(jī)(用于收集微生物菌體、細(xì)胞碎片以及其他沉淀物,有些樣品由于在常溫下不太穩(wěn)定,需要低溫環(huán)境)→恒溫金屬浴(用于DNA雜交過(guò)程中水浴控溫)(HtPot40恒溫金屬浴)→移液器(準(zhǔn)確量取特定體積溶液)→紫外燈或者消毒車(空間環(huán)境消毒)→混勻儀(移取樣本前需要混勻)(推薦艾本森品牌:MixMax漩渦混勻儀)→超凈工作臺(tái)(涉及對(duì)細(xì)菌的操作均需在超凈工作臺(tái)下完成)→低溫?fù)u床(用于大腸桿菌和酵母菌的振蕩培養(yǎng))→磁力攪拌器(加速溶解固體內(nèi)容物 )
3核酸擴(kuò)增區(qū)
功能:主要是DNA擴(kuò)增,已制備的DNA模板和合成的DNA和主反應(yīng)混合液,制備成反應(yīng)混合液等,也可以在本區(qū)域內(nèi)進(jìn)行。在PCR測(cè)定中,通常在擴(kuò)增后須打開反應(yīng)管。
基因擴(kuò)增儀 (基因檢測(cè)DNA/RNA擴(kuò)增)→熒光定量PCR儀(核酸定量分析)→核酸提取儀(樣品DNA/RNA提?。?/span>→移液器(準(zhǔn)確量取特定體積溶液)→紫外燈或者消毒車 (空間環(huán)境消毒)→超凈工作臺(tái)(涉及對(duì)細(xì)菌的操作均需在超凈工作臺(tái)下完成 )→純水裝置(用于PCR,DNA測(cè)序需要超純水)
4產(chǎn)物分析區(qū)
功能:主要進(jìn)行的操作為擴(kuò)增片段的測(cè)定,如使用全自動(dòng)封閉分析儀器檢測(cè),需要儀器設(shè)備:
基因擴(kuò)增儀 (基因檢測(cè)DNA/RNA擴(kuò)增)→熒光定量PCR儀(核酸定量分析)→核酸提取儀(樣品DNA/RNA提?。?/span>→移液器(準(zhǔn)確量取特定體積溶液)→紫外燈或者消毒車 (空間環(huán)境消毒)→超凈工作臺(tái)(涉及對(duì)細(xì)菌的操作均需在超凈工作臺(tái)下完成 )→純水裝置(用于PCR,DNA測(cè)序需要超純水
電泳儀(水平電泳用于核酸DNA/RNA檢測(cè),垂直電泳用于蛋白檢測(cè),轉(zhuǎn)印電泳用于將蛋白轉(zhuǎn)印到膜上做western檢測(cè))→凝膠成像系統(tǒng)/紫外檢測(cè)儀(用于核酸瓊脂電泳和蛋白聚丙酰胺的觀察和拍照,紫外分析儀用于染色后核酸瓊脂電泳膠觀察,不能連接電腦)→電爐(電泳瓊脂凝膠加熱融化)